CARACTERIZAÇÃO DE CULTURA PRIMÁRIA DE HEPATÓCITO DE MURINO PARA ESTUDOS DE BIOENERGÉTICA.

Thayná Martins Macario; Lorena de Oliveira Fernandes Siqueira; Andrea Da Poian

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Trabalho

Título do Trabalho

CARACTERIZAÇÃO DE CULTURA PRIMÁRIA DE HEPATÓCITO DE MURINO PARA ESTUDOS DE BIOENERGÉTICA.

Autores

Thayná Martins Macario
Lorena de Oliveira Fernandes Siqueira
Andrea Da Poian

Modalidade

Resumo apresentação oral curta

Área temática

Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Bioquímica

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/315581-caracterizacao-de-cultura-primaria-de-hepatocito-de-murino-para-estudos-de-bioenergetica

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Bioenergética, cultura primária, hepatócito

Resumo

Células imortalizadas e derivadas de carcinomas representam um importante modelo de estudo in vitro e são utilizadas em diversas linhas de pesquisas, dentre elas, estudos de bioenergética. Porém, sabemos que alguns tumores levam a mudanças no metabolismo celular, preferindo certos tipos de substratos em detrimento a outros, por exemplo, o efeito Warburg, possui a via glicolítica mais ativa do que vias de oxidação, aumentando a produção de lactato por essas células mesmo na presença de oxigênio (DIAZ-RUIZ et al., 2011). O uso de modelos ex vivo pode facilitar os estudos bioenergéticos por apresentarem o ambiente próximo ao fisiológico. Com a finalidade de entender o metabolismo dos hepatócitos, utilizamos o protocolo pré estabelecido de cultura primária de hepatócitos de murinos (CPHM) (DAVID et al., 2017) e caracterizamos o seu perfil bioenergético. Para isso, foi utilizado um protocolo de digestão hepática por colagenase. O camundongo da linhagem 129/SV (aprovação CEUA nº 145/18) foi anestesiado e foi feita uma perfusão com uma solução tampão com 0,8 mg/mL de colagenase e o órgão retirado. Os hepatócitos foram filtrados em uma membrana de 40 µm, centrifugados e colocados em placas de cultura pré-tratadas com colágeno. As células foram avaliadas quanto a viabilidade através de ensaio de integridade de membrana, consumo de oxigênio através de respirometria de alta resolução, análise qualitativa de morfologia mitocondrial e biogênese de gotículas lipídicas através de microscopia ótica de florescência. O protocolo de extração foi bem sucedido, tendo em vista o aumento da viabilidade da cultura primária ao longo do tempo, apresentando 70%, viabilidade no tempo de 24h e 80% de viabilidade nos tempos 48h e 72h após extração. A morfologia celular dos hepatócitos extraídos é compatível com a já apresentada na literatura. Já em relação a morfologia mitocondrial, as células apresentaram uma mudança no decorrer do tempo, mostrando alongamento mitocondrial em 48h e 72h, sugerindo que houve mudanças na dinâmica mitocondrial. Parece ocorrer uma diminuição de gotículas lipídicas (GLs) ao longo do tempo uma vez que há uma redução na área ocupada por essas estruturas. Os dados de respirometria sugerem que no período pós adesão (3h) as células tem um importante perfil oxidativo que reduz ao longo do tempo, independente do meio utilizado, William's E (WE), repleto de substratos energéticos ou meio ausente de substratos DMEM Zero (DZ), este último usado para avaliar a oxidação dos substratos endógenos. Os resultados mostraram que o protocolo adotado foi eficiente, que as células são viáveis e possuem características clássicas de hepatócitos. Mais estudos são necessários para caracterizar o modelo e ressaltar as diferenças em relação a linhagens tumorais ou imortalizadas. DIAZ-RUIZ, Rodrigo et al. The Warburg and Crabtree effects: On the origin of cancer cell energy metabolism and of yeast glucose repression. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Bioenergetics, v. 1807, n. 6, p. 568-576, 2011. DAVID, Bruna A et al. Isolation and high-dimensional phenotyping of gastrointestinal immune cells. Immunology. v. 151, p.56–70, 2017.

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

MACARIO, Thayná Martins; SIQUEIRA, Lorena de Oliveira Fernandes; POIAN, Andrea Da. CARACTERIZAÇÃO DE CULTURA PRIMÁRIA DE HEPATÓCITO DE MURINO PARA ESTUDOS DE BIOENERGÉTICA... In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/315581-CARACTERIZACAO-DE-CULTURA-PRIMARIA-DE-HEPATOCITO-DE-MURINO-PARA-ESTUDOS-DE-BIOENERGETICA. Acesso em: 26/04/2025