EXPRESSÃO E PURIFICAÇÃO DA ORNITINA DESCARBOXILASE DE LEISHMANIA DONOVANI.

Jhones Matheus da Silva Soares; Lais Farias de Carvalho; Luzineide Wanderley Tinoco

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Trabalho

Título do Trabalho

EXPRESSÃO E PURIFICAÇÃO DA ORNITINA DESCARBOXILASE DE LEISHMANIA DONOVANI.

Autores

Jhones Matheus da Silva Soares
Lais Farias de Carvalho
Luzineide Wanderley Tinoco

Modalidade

Resumo apresentação oral curta

Área temática

Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Bioquímica

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/315600-expressao-e-purificacao-da-ornitina-descarboxilase-de-leishmania-donovani

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Leishmaniose visceral, síntese de poliaminas

Resumo

A Leishmania donovani é uma das espécies de protozoários tripanossomatídeos do gênero Leishmania causadores da Leishmaniose, sendo esta espécie uma das causadoras da forma grave da doença a Leishmaniose Visceral (ZULFIQAR et al., 2017). A Ornitina Descarboxilase (ODC) é a enzima responsável pela conversão de Ornitina em Putrescina na síntese de poliaminas, que são importantes na proliferação e diferenciação celular. A Ornitina Descarboxilase também possui um papel importante no metabolismo redox através do controle da síntese de tripanotiona e na patogênese do protozoário através da modulação da resposta imune (DAS et al., 2016). Por conta da grande importância da Ornitina Descarboxilase no ciclo de vida da L. donovani, este trabalho tem por objetivo a expressão e purificação da Ornitina Descarboxilase de L. donovani (LdODC) para a busca de novos inibidores. Inicialmente, foi feita a clonagem do gene AAA29259.1 em pET28a com otimização de códon para aumentar a eficiência da expressão. A clonagem foi feita pela GeneScript com as enzimas de restrição EcoRI/XhoI, para que a ODC seja expressa com uma cauda de histidina no N-terminal, tendo também um sítio de clivagem por trombina e um T7 tag. Os testes de expressão da enzima estão sendo feitos a partir da cultura da cepa BL21 e BL21(DE3) de Escherichia coli transformada com o plasmídeo pET28a-ODC, conforme protocolo já descrito (Yadav et al., 2015). Brevemente, a expressão é feita a partir da indução com 1 mM de IPTG (Isopropil-ß-D-1-tio-galactopiranosideo) a 37 oC por 24h e a purificação feita em coluna cromatográfica por afinidade a níquel, sendo a ODC eluída com 250 mM de imidazol. CNPq, CAPES, FAPERJ Referências Bibliográficas: Das, M., Singh, S. & Dubey, V. K. Novel Inhibitors of Ornithine Decarboxylase of Leishmania Parasite ( Ld ODC): The Parasite Resists Ld ODC Inhibition by Overexpression of Spermidine Synthase. Chem. Biol. Drug Des, 2016. v.87, n.3, p.352–360. Yadav, A., Amit, A., Chaudhary, R., Chandel, A. S., Mahantesh, V., Suman, S. S., Subhankar Singh, K., Dikhit, M. R., Ali, V., Rabidas, V., Pandey, K., Kumar, A., Pradeep Das, P., Sanjiva Bimal, S. Leishmania donovani: impairment of the cellular immune response against recombinant ornithine decarboxylase protein as a possible evasion strategy of Leishmaniain visceral leishmaniasis, Int. J. Parasit, 2015. n.45 p.33–42 Zulfiqar, B., Shelper, T. B. & Avery, V. M. Leishmaniasis drug discovery: recent progress and challenges in assay development. Drug Discov Today, 2017, v.22, n. 10, p.1516–1531.

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

SOARES, Jhones Matheus da Silva; CARVALHO, Lais Farias de; TINOCO, Luzineide Wanderley. EXPRESSÃO E PURIFICAÇÃO DA ORNITINA DESCARBOXILASE DE LEISHMANIA DONOVANI... In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/315600-EXPRESSAO-E-PURIFICACAO-DA-ORNITINA-DESCARBOXILASE-DE-LEISHMANIA-DONOVANI. Acesso em: 29/04/2025