PRODUÇÃO RECOMBINANTE DAS PROTEÍNAS THREE-FINGER TOXINS (3FTXS) DE VENENO DE SERPENTES DO GÊNERO MICRURUS BRASILEIRAS.

Edson Araujo Trajano; Jessica Matos Kleiz Ferreira; Marcius da Silva Almeida; RUSSOLINA BENEDETA ZINGALI

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Trabalho

Título do Trabalho

PRODUÇÃO RECOMBINANTE DAS PROTEÍNAS THREE-FINGER TOXINS (3FTXS) DE VENENO DE SERPENTES DO GÊNERO MICRURUS BRASILEIRAS.

Autores

Edson Araujo Trajano
Jessica Matos Kleiz Ferreira
Marcius da Silva Almeida
RUSSOLINA BENEDETA ZINGALI

Modalidade

Resumo apresentação oral padrão

Área temática

Centro de Ciências da Saúde (CCS)/Bioquímica

Data de Publicação

22/03/2021

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/jgmictac/316387-producao-recombinante-das-proteinas-three-finger-toxins-(3ftxs)-de-veneno-de-serpentes-do-genero-micrurus-brasile

ISBN

978-65-5941-128-3

Palavras-Chave

Three-Fingers, Toxina, Expressão, Reenovelamento

Resumo

As toxinas Three-fingers (3FTxs) compõem uma família de proteínas não-enzimáticas caracterizadas pela estrutura de 3 loops ricos em folhas betas que se projetam a partir de seu núcleo hidrofóbico e são estabilizados por 4 pontes dissulfeto conservadas. Essas proteínas possuem grande potencial farmacológico devido a sua multifuncionalidade e seu tamanho reduzido (KINI, R. M.; DOLEY, R., 2010). No entanto, um dos principais desafios do estudo tem sido a produção recombinante de forma solúvel por conta de eventuais formações incorretas das pontes dissulfeto que podem levar a formação de corpos de inclusão (LYUKMANOVA et al., 2009). O presente trabalho visa executar e otimizar o protocolo de expressão e reenovelamento de uma 3FTx para obtenção de proteína solúvel. Foram utilizados plasmídeos pET 25b, com o gene de interesse, inseridos na bactéria pela técnica "heat shock". O cultivos foram iniciados em placas de Petri e um arraste de células da placa foi utilizado para a realização do pré-inóculo em meio LB sob agitação overnight a 37°C. Na fase de inoculação, 5% do pré-inóculo foi transferido para 600 ml de meio LB com os devidos antibióticos. A expressão foi induzida com 1 mM de IPTG e se deu sob agitação overnight a 18°C. Nos passos de preparação para o reenovelamento, as células passaram por lise e os corpos de inclusão foram lavados na presença de 2M de ureia e Triton X-100. Para a dissolução dos corpos de inclusão, foi utilizada uma concentração de 8M de ureia e 1mM de TCEP, um forte agente redutor. Para a purificação, foram realizadas cromatografias de troca catiônica em uma coluna HiTrap SP HP e um segundo passo de purificação em uma coluna C8 de fase reversa. O reenovelamento das proteínas purificadas ocorreu de forma gradual em tampão NaPi, 1.5 M de ureia, L-Arginina, GSH e GSSG durante 3 dias (LYUKMANOVA et al., 2009). A proteína foi expressa com bom rendimento, porém de forma insolúvel em corpos de inclusão. Os métodos objetivando a dissolução das proteínas agregadas e a purificação tiveram resultados positivos. Após a etapa de reenovelamento, não identificamos proteínas devidamente enoveladas nos espectros de Ressonância Magnética Nuclear. No entanto, considerando que o reenovelamento tem baixo rendimento, a quantidade de proteínas utilizada pode ter sido insuficiente para a detecção. Novas condições estão sendo avaliadas em especial para o melhoramento da renaturação. 4. Referências: KINI, R. M.; DOLEY, R. Structure, function and evolution of three-finger toxins: Mini proteins with multiple targets. Toxicon, 2010. v. 56, n. 6, p. 855–867. LYUKMANOVA, E. N. et al. Bacterial production and refolding from inclusion bodies of a “Weak” toxin, a disulfide rich protein. Biochemistry (Moscow), 2009. v. 74, n. 10, p. 1142–1149.

Título do Evento: XLII Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural (JICTAC 2020 - Edição Especial) - Evento UFRJ
Título dos Anais do Evento: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

TRAJANO, Edson Araujo et al.. PRODUÇÃO RECOMBINANTE DAS PROTEÍNAS THREE-FINGER TOXINS (3FTXS) DE VENENO DE SERPENTES DO GÊNERO MICRURUS BRASILEIRAS... In: Anais da Jornada Giulio Massarani de Iniciação Científica, Tecnológica, Artística e Cultural. Anais...Rio de Janeiro(RJ) UFRJ, 2021. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/jgmictac/316387-PRODUCAO-RECOMBINANTE-DAS-PROTEINAS-THREE-FINGER-TOXINS-(3FTXS)-DE-VENENO-DE-SERPENTES-DO-GENERO-MICRURUS-BRASILE. Acesso em: 24/04/2025