CONSTRUÇÃO DE UM MUTANTE NULO NO GENE QUE CODIFICA UMA CICLOPROPANO SINTASE DE ÁCIDOS GRAXOS (CFA) DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA PARA AVALIAR SUA INFLUÊNCIA SOBRE O ESTRESSE OXIDATIVO E VIRULÊNCIA

Lais Nogueira Machado; Igor Nascimento; Diogo de Abreu Meireles

Título do Trabalho

Autores

Lais Nogueira Machado
Igor Nascimento
Diogo de Abreu Meireles

Modalidade

Resumo

Área temática

Eixo Temático 2 - Fome zero, Saúde e Bem-estar

Data de Publicação

09/09/2024

País da Publicação

Brasil

Idioma da Publicação

Português

Página do Trabalho

https://www.even3.com.br/anais/xvi-confict-ix-conpg-445276/846294-construcao-de-um-mutante-nulo-no-gene-que-codifica-uma-ciclopropano-sintase-de-acidos-graxos-(cfa)-de-pseudomonas

ISBN

978-65-272-0687-3

Palavras-Chave

Pseudomonas aeruginosa, Ciclopropanação, Estresse oxidativo

Resumo

Uma modificação pós-sintética comum nos lipídios de membrana bacteriana é a formação de um ciclopropano em ácidos graxos monoinsaturados em resposta a diferentes tipos de estresses. Embora a presença dessa modificação nos lipídios de membrana em P. aeruginosa seja observada, a existência de uma putativa Cfa sintase nunca foi descrita neste microrganismo. Assim, o objetivo deste trabalho foi identificar em P. aeruginosa o gene que codifica uma putativa Cfa e construir um mutante nulo para estudar sua relação com o estresse oxidativo. Para isso, inicialmente realizou-se um blast utilizando sequências de proteínas de duas Cfas em P. putida, CfaA e CfaB. O resultado revelou que P. aeruginosa possui apenas uma putativa Cfa em seu genoma, anotada como PA14_73140, que apresenta 68% de identidade com CfaB de P. putida. A deleção do gene PA14_73140 foi realizada por recombinação homóloga, utilizando pares de oligonucleotídeos que amplificam regiões adjacentes a este gene, resultando na remoção de 1146 nucleotídeos centrais de sua região codificante. Para a clonagem desses fragmentos no vetor suicida pEX18Ap, foi utilizada a clonagem clássica. Os fragmentos foram amplificados e digeridos com as enzimas NdeI/HindIII e EcoRI/NdeI, respectivamente, enquanto o vetor pEX18Ap foi digerido com EcoRI e HindIII. Os fragmentos e o vetor digeridos foram purificados e submetidos à ligação. Em seguida, a reação de ligação foi transformada em E. coli DH5a e as colônias obtidas foram cultivadas para extração dos plasmídeos para confirmação da clonagem por digestão. A construção obtida foi nomeada de pEX18Ap_del_cfa. Ela será transformada em E.coli S17.1 e transferida por conjugação para a linhagem selvagem de P. aeruginosa para que ocorram os eventos de recombinação. A presença ou ausência de ciclopropanação nos lipídeos de membrana nas linhagens obtidas será realizada inicialmente por espectroscopia de Ressonância Magnética Nuclear (RMN) ou por espectrometria de massas.

Título do Evento: XVI CONFICT / IX CONPG
Cidade do Evento: Campos dos Goytacazes
Título dos Anais do Evento: Anais do XVI Congresso de Iniciação Científica e Tecnológica e IX Congresso Fluminense de Pós-Graduação
Nome da Editora: Even3
Meio de Divulgação: Meio Digital

Como citar

MACHADO, Lais Nogueira; NASCIMENTO, Igor; MEIRELES, Diogo de Abreu. CONSTRUÇÃO DE UM MUTANTE NULO NO GENE QUE CODIFICA UMA CICLOPROPANO SINTASE DE ÁCIDOS GRAXOS (CFA) DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA PARA AVALIAR SUA INFLUÊNCIA SOBRE O ESTRESSE OXIDATIVO E VIRULÊNCIA.. In: Anais do XVI Congresso de Iniciação Científica e Tecnológica e IX Congresso Fluminense de Pós-Graduação. Anais...Campos dos Goytacazes(RJ) UENF, 2024. Disponível em: https//www.even3.com.br/anais/xvi-confict-ix-conpg-445276/846294-CONSTRUCAO-DE-UM-MUTANTE-NULO-NO-GENE-QUE-CODIFICA-UMA-CICLOPROPANO-SINTASE-DE-ACIDOS-GRAXOS-(CFA)-DE-PSEUDOMONAS. Acesso em: 30/04/2025